Inkubējiet trauku istabas temperatūrā 2-3 minūtes . Stingri pielipušās šūnas var ātri atdalīt 37 °C temperatūrā. Novērojiet šūnas mikroskopā. Atdalītās šūnas mikroskopā šķiet noapaļotas un laužas.
Kas notiks, ja pārāk ilgi tripsinizēsit šūnas?
Šūnu inkubēšana ar pārāk augstu tripsīna koncentrāciju pārāk ilgu laika periodu bojās šūnu membrānas un nogalinās šūnas. Ja neesat pārliecināts par lietojamā tripsīna koncentrāciju, izmantojiet zemu koncentrāciju.
Kā jūs tripsinizējat šūnas?
Šūnas var atkārtoti suspendēt, uzmanīgi ar pipeti ievadot šūnu suspensiju, lai izjauktu kopas. Ja nepieciešams, var veikt papildu atšķaidīšanu, lai noteiktu šūnu skaitu un/vai subkultūru.
Cik ilgs laiks nepieciešams, lai šūnas pievienotos?
pirmās šūnas pievienojas jau pēc 3-5 min! Pēc manas pieredzes lielākā daļa EC tika pievienoti pēc 10-20 min. Bet jo ilgāk gaidāt, jo stiprāka ir pieķeršanās.
Vai ir slikti veikt šūnu tripsinizāciju divas dienas pēc kārtas?
Jā, tas ir kaitīgi, ja jūs nepārtraukti tripsinizējat savas šūnas pēc 24 stundu sadalīšanas. Sadalīšanu ieteicams veikt pēc 48 stundām. … Jūs varat uzturēt šūnas, līdz morfoloģija ir laba (tas ir atkarīgs no jūsu šūnu veida, dažas šūnas var veikt līdz 80 pasāžām, bet dažas līdz 10).
