Tripsinizācija ir šūnu disociācijas process, izmantojot tripsīnu, proteolītisko enzīmu, kas sadala olb altumvielas, lai atdalītu pielipušās šūnas no trauka, kurā tās tiek kultivētas. Pievienojot šūnu kultūrai, tripsīns sadala olb altumvielas, kas ļauj šūnām pielipt pie asinsvada.
Kāpēc mēs tripsinizējam šūnas?
Tripsinizāciju bieži veic, lai atļautu šūnu pāreju uz jaunu tvertni, novērojumiem eksperimentiem vai sateces pakāpes samazināšanu kolbā, noņemot procentuālo daļu šūnas.
Kā darbojas tripsīns, lai atdalītu šūnas?
Tripsīns/EDTA ir kombinēta šūnu atdalīšanas metode. Tripsīns samazina adhēzijas proteīnus šūnu-šūnu un šūnu-matricas mijiedarbībā, sagriežot adhēzijas proteīnu aminoskābi īpaši pie lizīna vai aginīna C-galā, ja augšpus aminoskābe nav prolīns.
Kā iegūt tripsinizētas pielipušās šūnas?
Procedūra
- Izņemiet barotni no kultivēšanas trauka ar aspirāciju un nomazgājiet monoslāni ar sāls šķīdumu, kas nesatur Ca2+ un Mg 2+, lai noņemtu visas seruma pēdas. …
- Ievietojiet kultivēšanas traukā(-os) pietiekami daudz tripsīna vai tripsīna/EDTA šķīduma, lai pilnībā pārklātu šūnu monoslāni, un ievietojiet 37 °C inkubatorā uz ~ 2 minūtēm.
Kā atspējot tripsīnu šūnu kultūrā?
Kad šūnas ir atdalītas, pievienojiet 2 sējumusiepriekš uzsildītas pilnīgas augšanas barotnes, lai inaktivētu tripsīnu. Uzmanīgi izkliedējiet barotni, vairākas reizes pipetē laižot pa šūnu slāņa virsmu, lai nodrošinātu >95% šūnu atgūšanu. Kultūrām, kas nesatur serumu, sojas pupu tripsīna inhibitors (produkta Nr.
