Pirmkārt, gan EcoR1, gan Xba1 atstāj 5' pārkares, kad tās sagremo DNS (tāpat kā Nde1). Abos gadījumos 3' gals ir padziļināts, tāpēc poliermāze var pievienot pamatnes. Otrkārt, visas polimerāzes var pievienot bāzes tikai 3' galam, tāpēc Klenow pievienos 4 bāzes abu vietu atkāpušajam 3' galam, lai radītu neasus galus.
Vai restrikcijas enzīmi atstāj 5 fosfātu?
Vektori un ieliktņi, kas sagremoti ar restrikcijas enzīmiem, satur nepieciešamās gala modifikācijas (5' fosfāts un 3' hidroksilgrupa), savukārt fragmenti, kas izveidoti polimerāzes ķēdes reakcijas (PCR) rezultātā, nedrīkst.
Vai strupos galus var sasiet?
Neaso galu nosiešana
Neaso galu nosiešana neietver izvirzīto galu savienošanu pārī, tāpēc jebkuru neaso galu var sasiet ar citu neaso galu. Neasus galus var radīt restrikcijas enzīmi, piemēram, SmaI un EcoRV.
Vai Taq polimerāze rada neasus galus?
Jā… Taq Polymerase pievieno A-pārkares, ja saglabājat pēdējo pagarināšanas soli pie 72 dC PCR. Pārsvarā izmanto TA klonēšanai.
Kāpēc DNS sekvencēšanā izmantot Klenova fragmentu?
Klenova fragments ir ārkārtīgi noderīgs uz pētniecību balstītiem uzdevumiem, piemēram: Divpavedienu DNS sintēze no vienpavedienu veidnēm . DNS fragmentu atkāpušos 3' galu aizpildīšana, lai padarītu 5' pārkari neasus . Sagremot izvirzītās 3' pārkares.
