Kontroles antivielu iekraušana ir svarīgas kontroles, jo tās norāda uz vienādu paraugu ielādi visās iedobēs. Ielādes vadīklas arī norāda pareizu olb altumvielu pārnešanu uz membrānu Western blotēšanas procesa laikā. Ielādes kontroles parasti ir proteīni ar augstu un visuresošu ekspresiju.
Ko dara ielādes vadīkla?
Iekraušanas kontrole ir proteīns, ko izmanto kā kontroli Western blotēšanas eksperimentā. … Tie tiek lietoti, lai nodrošinātu, ka proteīns ir vienādi ielādēts visās iedobēs.
Kāpēc Western blotā izmantojam ielādes vadīklu?
Ielādēšanas vadīklām ir otra nozīme kā vadīklai Western blotos. Tos var izmantot lai pārbaudītu, vai no želejas uz membrānu ir notikusi vienmērīga pārnešana visā gēlā. Tas ir obligāti, ja tiek salīdzināti olb altumvielu ekspresijas līmeņi starp paraugiem.
Kā jūs izmantojat ielādes vadīklu Western blotā?
Signāli no ielādes vadīklām parasti tiek izmantoti lai normalizētu signālus no interesējošajiem proteīniem. Lai šiem nolūkiem izmantotu iekraušanas kontroli, noteikšana ar kontroles proteīna antivielu un eksperimentālo antivielu jāveic vienā un tajā pašā blotē. Kā ielādes kontroles tiek izmantoti dažādi proteīni.
Kāpēc aktīns tiek izmantots kā ielādes kontrole?
Beta-aktīns parasti tiek izmantots kā Western Blot ielādes kontrole, lainormalizēt konstatēto proteīna līmeni, apstiprinot, ka proteīna slodze visā gēlā ir vienāda.
