Varat arī atsālīt savu paraugu, ultrafiltrējot līdz 1 desmitajai daļai no iepriekšējā tilpuma, kas atkal atšķaida un atkārto UF darbību. Labākā atsāļošanas metode ir atsāļošana ar gēla filtrēšanu pret 50 mM buferšķīdumu, nekā ultrafiltrācija (klasiskā, nevis centrbēdzes).
Kas ir atsāļošana olb altumvielu attīrīšanā?
Atsālīšanu izmanto lai noņemtu sāļus no proteīnu šķīdumiem, fenolu vai neinkorporētus nukleotīdus no nukleīnskābēm vai lieko šķērssaistīšanas vai marķēšanas reaģentu no konjugētajiem proteīniem.
Kā jūs attīrāt olb altumvielas?
Lielapjoma olb altumvielu attīrīšanā parasti pirmais solis proteīnu izolēšanai ir nogulsnēšana ar amonija sulfātu (NH4) 2SO4. To veic, pievienojot pieaugošus amonija sulfāta daudzumus un savācot dažādas nogulsnētā proteīna frakcijas. Pēc tam amonija sulfātu var noņemt, izmantojot dialīzi.
Kā jūs buferat apmaiņas proteīnus?
Bufera apmaiņa tomēr tiek veikta, vispirms līdzsvarojot ar kolonnas sveķiem ar buferšķīdumu, kurā paraugam jānonāk. Abos gadījumos bufera sastāvdaļas, kas ved paraugu kolonna tiks aizstāta ar šķīdumu, ar kuru kolonna ir iepriekš līdzsvarota.
Kuru no tālāk norādītajām hromatogrāfijas metodēm var izmantot proteīnu atsāļošanai?
Kā minēts iepriekš, gēla filtrāciju var efektīvi izmantot olb altumvielāmatsāļošana, un to panāk, vispirms līdzsvarojot gēla filtrēšanas kolonnu ar ūdeni. Tomēr bufera apmaiņa tiek veikta, vispirms līdzsvarojot kolonnas sveķus ar mērķa buferi.
